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(检测到网址内容请求,以下将针对高效液相色谱技术提供专业解析)
关于高效液相色谱(HPLC)技术的核心要点,结合工程实践建议如下:
1. 系统组成关键点
- 高压输液泵(工作压力通常15-40MPa)
- 梯度洗脱系统(二元/四元比例阀控制)
- 色谱柱(C18反相柱最常用,粒径3-5μm)
- 检测器(UV-Vis、DAD、ELSD等选型依据样品特性)
2. 方法开发经验准则
2.1 流动相优化
- 乙腈/甲醇与水相比例梯度测试
- 添加0.1%甲酸/乙酸铵改善峰形
- 流速范围1.0-2.0mL/min(根据柱压调整)
2.2 柱温控制
- 常规分析保持30℃
- 热不稳定样品建议25℃以下
- 高温分析(60℃以上)需专用耐高温柱
3. 故障排查技巧
3.1 压力异常
- 基线压力上升:检查滤头堵塞(0.45μm过滤器预处理)
- 压力波动:排查泵头气泡或单向阀污染
- 压力骤降:确认柱床塌陷或连接漏液
3.2 峰形异常
- 拖尾峰:调节pH或添加离子对试剂
- 分叉峰:检查柱头筛板是否堵塞
- 保留时间漂移:监控室温变化及流动相组成
4. 维护保养要点
- 每日冲洗:先用5%甲醇冲洗,再用存储溶剂平衡
- 每周维护:超声清洗在线过滤器
- 色谱柱再生:反向冲洗时压力不超过最大耐受值80%
需要特定应用场景(如手性分离、制备色谱等)的解决方案可进一步沟通。实际工作中建议建立系统适用性测试(SST)标准,确保数据重现性。
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