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关于液相色谱（HPLC）柱的选择和使用，结合现场经验说几个工程师最关心的要点：
1. 固定相类型选型三板斧
- 反相C18（十八烷基键合硅胶）适用80%以上小分子有机化合物，流动相用甲醇/乙腈-水体系
- 极性样品考虑HILIC（亲水作用色谱）柱，乙腈占比＞70%时分离效果更好
- 手性拆分必须用专用手性柱（含环糊精等特殊填料），注意流动相pH对立体结构的影响
2. 物理参数匹配技巧
- 5μm粒径最通用（兼顾柱效和背压），研发用3μm柱效提升30%但系统压力翻倍
- 150mm柱长适合常规分析，方法开发时可用50mm短柱快速筛选条件
- 4.6mm内径是分析级标配，2.1mm内径接质谱时灵敏度提高4倍但容易堵
3. 操作避坑指南
- 流动相pH必须控制在2-8（硅胶基质的耐受极限），超出范围会导致填料溶解
- 柱温超过40℃时每升高1℃柱压下降约2%，但硅胶柱长期高温使用会加速键合相水解
- 新柱活化先用5倍柱体积的甲醇低流速（0.2ml/min）冲洗，特别是封存过的柱子
4. 柱再生与维护
- 蛋白质污染用0.1M NaOH低流速冲洗1小时，强保留物质用THF（四氢呋喃）反冲
- 筛板堵塞可拆下用6M硝酸超声处理，但重新安装时需注意密封圈方向
- 长期保存必须用纯乙腈充满管路，避免水相滋生微生物或产生盐结晶
5. 异常现象处理
- 峰分裂：可能是柱头塌陷，尝试切割掉前0.5cm填料后更换筛板
- 压力突增：先排除管路堵塞，若确定为柱堵，用异丙醇梯度冲洗（20%-100%逐步过渡）
- 保留时间漂移：检查柱温波动是否超过±1℃，硅胶柱在环境温度变化5℃时保留时间偏移可达15%
实际案例：某原料药有关物质分析出现肩峰，更换为Agilent Zorbax SB-C18（表面带电杂化颗粒技术）后分离度提升，因其耐受pH范围宽（1.5-11.5）允许使用0.1%甲酸改善峰形。这类表面修饰技术柱比传统硅胶柱寿命延长约40%，适合复杂样品分析。
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发表于 2025-4-12 09:01:40
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